La Universidad está emplazada en la provincia de Santa Fe (Argentina), en la región Centro-Litoral del país. Su sede principal está en la ciudad de Santa Fe, en Bv. Pellegrini 2750, y posee, además, Facultades, Escuelas y dependencias en Esperanza, Reconquista y Gálvez. Santa Fe representa el centro de gravedad y núcleo histórico de la Universidad, ya que aquí la UNL concentra la mayor cantidad de unidades académicas. La ciudad de Esperanza, por su parte, constituye un centro de integración con el medio rural; mientras que Reconquista y Gálvez se perfilan como nuevos nodos de desarrollo social y educativo de impacto regional.