Tema: Análisis de proteínas recombinantes mediante espectrometría de masa (tipo MALDI-TOF).

Plan de trabajo a desarrollar por el graduado.
* Expresión y purificación de proteínas recombinantes
Se expresarán proteínas recombinantes a partir de clones obtenidos con anterioridad en el laboratorio. La expresión se realizará utilizando organismos procarióticos y vectores con tags que permitan su purificación por cromatografía FPLC.
* Determinación de la masa e identidad de las proteínas recombinantes purificadas mediante espectrometría de masas tipo MALDI-TOF. Se analizarán proteínas recombinantes de manera individual mediante espectrometría de masa tipo MALDI-TOF con la finalidad de determinar la masa e identidad.
* Preparación de mezclas conocidas de proteínas recombinantes para la determinación de las masas individuales y reconocimiento mediante espectrometría de masa tipo MALDI-TOF. Se realizarán mezclas conocidas de proteínas recombinantes con el objetivo de determinar las masas individuales y sus identidades mediante MALDI-TOF. Dichas mezclas serán pre-tratadas con diferentes metodologías:
1) Tripsinización.
2) Tripsinización seguida de separación de los péptidos por nano-HPLC. Los picos de detección más altos serán sembrados en forma robotizada y luego analizados por MALDI.
3) Separación de proteínas mediante PAGE en condiciones desnaturalizantes. Se introducirán los eluatos desteñidos provenientes de cada spot en las placas de MALDI en forma manual, con y sin tripsinización.
4) Análisis sin tripsinización previa.
* Optimización de diferentes metodologías para la separación de los componentes de las mezclas (nHPLC, SDS-PAGE, etc.). Se analizarán diferentes metodologías de pre-tratamiento de muestra para posterior análisis mediante espectrometría de masa tipo MALDI-TOF. Entre ellas se analizará la electroforesis en gel de oliacrilamida en condiciones desnaturalizantes y nano-HPLC. Se evaluarán los niveles de discriminación, especificidad y sensibilidad que se obtengan para elegir la metodología de pre-tratamiento más adecuada.

Lugar de realización de las actividades previstas:
Instituto De Salud Y Ambiente Del Litoral (ISAL) y Departamento de Bioquímica Clínica y Cuantitativa. FBCB, UNL.

Condiciones de los aspirantes:
Ser Licenciados en Biotecnología y tener conocimientos comprobables de purificación de proteínas.

Lugar y Período de inscripción:
Secretaría Académica de la FBCB (3er Piso) desde el lunes 2/9 al viernes 6/9.